新鮮全血RNA提取試劑盒(離心柱型,Safe)

Fresh Blood RNA Extraction Kit(SpinColumn)

包裝規格：

本產品僅用于科研，禁止用于醫藥、臨床醫療、食品和化妝品等用途。

產品介紹：
全血RNA提取試劑盒，適用于血液RNA提取。含有紅細胞裂解液優先去除血液樣品的紅細胞，避免過多的雜質污染， 在進行裂解；結合特異性的吸附柱，無需使用苯酚、氯仿等有機試劑，即可提取無蛋白、基因組、細胞代謝物等雜質污染的高純度、高質量的總RNA。

可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A篩選、體外翻譯、構建cDNA文庫等各種分子生物學實驗。

產品特點：
無污染：整套試劑盒采用RNase-Free處理。 
特殊性：適用于提取血液樣品等液體樣品的總RNA。
易操作：操作簡便，提取過程僅需 40 分鐘左右。 
安全性：無需使用苯酚、氯仿等有機試劑。
吸附柱：含有特異性吸附柱。通過漂洗－離心－洗脫的步驟提取。
高質量：有效保證RNA的完整性，回收RNA 效率高，純度高，沒有蛋白和其他雜質污染。OD260/OD280的比值可達1.9~2.2，可用于各種分子生物學實驗。

操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）
1.在適合大小的RNase free離心管中加入1倍體積（0.5~1.0ml）含有抗凝劑的新鮮血液樣本和3倍體積的1x紅細胞裂解液RLB（請先檢查是否稀釋到1x）顛倒混勻。
2.室溫放置10分鐘（期間應該顛倒輕彈混勻數次幫助裂解紅細胞）。如果RNA降解嚴重，可在冰上裂解，但要適當延長裂解時間。
3.12,000 rpm離心20秒，倒棄紅色上清，留下完整的管底白細胞團，小心的盡可能多的吸棄上清（注意不要吸到管底的細胞團）。如果看到的是大部分的紅色細胞團，說明紅細胞裂解不充分，應該再加入紅細胞裂解液RLB重懸細胞團后重復步驟2，3。
4.加入350μl（<0.5 ml全血）或者600μl（0.5~1.5ml全血）裂解液RLT渦旋或者輕彈管壁將白細胞沉淀完全松散重懸，吹打混勻后用手劇烈振蕩20秒，充分裂解。或者按照350μl（<2×106白細胞）或者600μl（2×10⁶ ~ 1×10⁷白細胞）的樣品量添加裂解液RTL。可用移液器混合勻漿。
5.估計勻漿液體積，加入等體積的70%乙醇（請先檢查是否已加入無水乙醇），可能會出現沉淀，立即吹打混勻。
6.將混合溶液（每次小于700μl）滴入套有吸附柱RA的離心管中，13,000 rpm離心60秒，棄掉廢液。
7.加700μl 去蛋白液RW1，室溫放置1分鐘，12，000rpm 離心30秒，棄掉廢液。
8.加入500μl漂洗液RW（請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm 離心30秒，棄掉廢液。
9.重復步驟8一次。
10.將吸附柱RA放回收集管中，13,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。
11.取出吸附柱RA（避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的廢液），放入新的RNase - free離心管中，在吸附膜的中間部位加30 ~ 50μl RNase-free H2O室溫靜置1分鐘，12,000 rpm 離心1分鐘。取得RNA后，將RNA溶液保存在－80°C，防止降解。

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