總蛋白提取試劑盒

產品介紹：
本試劑盒提供全套試劑，適用于從各種哺乳動物細胞（原代或傳代細胞、貼壁或懸浮細胞等）和各種實體軟組織（如腦、脊髓、神經結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織）提取總蛋白。提取過程簡單方便，無須超速離心機。本試劑盒含有的獨特變性劑能夠溶解細胞膜包括細胞質膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫共沉淀等蛋白研究。

產品配制和儲存：
為方便運輸，提供PMSF為晶體狀，收到后，可短暫離心后，加入1ml無水乙醇或者異丙醇溶解成100mM PMSF儲液，2-8℃保存至少半年，－20℃長期保存，可分裝成小份貯存于-20℃。TPEB可2-8℃保存半年，－20℃長期保存。如TPEB有沉淀析出，可37℃-60℃水浴重新溶解完全后回復到室溫使用。

使用方法：
A. 細胞總蛋白提取
1. 每500 μl裂解液，在使用前數分鐘內加入5 μl PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。
2. 取5-10×106個細胞，在4℃，500 g條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞。
3. 用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每5×106個細胞中加入500 μl冷的裂解液，混勻后，在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
5. 在4℃，16,000 g條件下離心15分鐘。
6. 快速將上清轉移至另一預冷的干凈離心管，即可得到總蛋白。

B. 組織總蛋白提取
1. 每500 μl裂解液，在使用前數分鐘內加入5 μl PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。
2. 取100 mg組織樣本剪碎，加入裂解液，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體。
3. 將組織勻漿吸入另一預冷的干凈離心管中，在4℃，16000 g條件下離心5分鐘。
4. 快速將上清轉移至另一預冷的干凈離心管，即可得到總蛋白。
上述蛋白提取物可立即用于后續實驗，或分裝后于-80℃冰箱保存備用。
注意事項：1. 實驗過程中的所有試劑可冰上預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。
2. 整個過程須保持樣品處于低溫狀態。
3. 蛋白濃度用BCA法測定 。