高產量質粒小量快速提取試劑盒(離心柱型)

HighYield Plasmid Mini Extraction Kit(SpinColumn)

包裝規格：

產品介紹：

本試劑盒采用獨特的高產量SDS-堿裂解法配方裂解細胞，質粒產量提高1-2倍。離心吸附柱內的硅基質膜在高鹽、低pH值狀態下選擇性地結合溶液中的質粒DNA，再通過去蛋白液和漂洗液將雜質和其它細菌成分去除，最后低鹽、高pH值的洗脫緩沖液將純凈質粒DNA從硅基質膜上洗脫。

產品特點：
1.特殊改進的高產量緩沖液配方可以把質粒產量提高1-2倍。
2.獨有的去蛋白液配方，可以高效去除殘留的核酸酶，即使是核酸酶含量豐富的菌株如JM系列、HB101也可以輕松去除。有效防止了質粒被核酸酶降解。
3.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。獲得的質粒產量高、純度好，可以直接用于酶切、轉化、PCR、體外轉錄、測序等各種分子生物學實驗。

適用范圍：
本試劑盒適用菌株為XL-1 Blue、Top10和DH5α等核酸酶含量低缺陷型菌株，同時核酸酶含量豐富的菌株如JM系列、HB101也可以輕松去除。

操作步驟：
提示：
?第一次使用前請先在漂洗液Buffer WB瓶和去蛋白液Buffer PE瓶中加入指定量無水乙醇，充分混勻，加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!
?將RNase A全部加入溶液P1中，混勻，每次使用后置于2-8℃保存。

1.取1.5-5 mL過夜培養的菌液，12,000 rpm離心30秒，盡可能的倒干上清，收集菌體。
收集超過1.5 mL菌液， 可以離心棄上清后，在同一個1.5 mL管內加入更多的菌液，重復步驟1，直到收集到足夠的菌體。

2.用250 μL溶液P1重懸菌體沉淀，渦旋振蕩至徹底懸浮。
如果有未徹底混勻的菌塊，會影響裂解，導致提取量和純度偏低。

3.加250 μL的溶液P2，溫和地上下翻轉6-8次使菌體充分裂解，室溫放置4分鐘。
溫和地混合，不要劇烈震蕩，以免基因組DNA剪切斷裂！所用時間不應超過5分鐘！以免質粒受到破壞。此時菌液應變得清亮粘稠，如果菌體少，很快清亮粘稠后就可以做下一步，不是一定要準確的5分鐘。

4.加250 μL溶液N3，立即溫和地上下翻轉6-8次，充分混勻時會出現白色絮狀沉淀。12,000 rpm離心10分鐘，小心取上清至新管，避免吸取到漂浮白色沉淀。
加入溶液N3后應該立即混勻，以免產生SDS的局部沉淀。
平衡液預處理吸附柱：
使用平衡液預處理硅膠膜吸附柱為必做步驟，具體方法參見前文“關于平衡液的使用”

5.向上清中加入0.5體積異丙醇（約335 μL）后充分顛倒混勻后分兩次（每次不超過700 μL）轉入吸附柱Spin AC中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm離心30秒，倒掉收集管中的廢液。直到所有混合溶液通過此吸附柱。

6.可選步驟:加入500 μL去蛋白液Buffer PE，12,000 rpm離心30秒，棄廢液。
此步驟為了去除痕量核酸酶等雜質，如所用菌株為JM系列、HB101等endA菌株或野生型菌株，核酸酶含量豐富，應加此步驟；如所用菌株為XL-1 Blue、Top10和DH5α等缺陷型菌株，核酸酶含量低，則可略過此步驟。

7.加入600 μL漂洗液Buffer WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000 rpm離心30秒，棄掉廢液。再加入600 μL漂洗液Buffer WB，重復漂洗一次。

8.將吸附柱Spin AC放回空收集管中，12,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。

9.取出吸附柱Spin AC，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加50-100 μL洗脫緩沖液Buffer EB，室溫放置2分鐘，12,000 rpm離心1分鐘。如果需要較多量質粒，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，離心1分鐘。
洗脫體積越大，洗脫效率越高。如果需要質粒濃度較高，可以適當減少洗脫體積， 但是最小體積不應少于30 μL，體積過小降低質粒洗脫效率，減少質粒產量。