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Super ibac P DNA 桿狀病毒DNA

包裝規格：

200816

Super ibac P DNA桿狀病毒DNA

5rnx

7000元

產品簡介：

通過對桿狀病毒DNA的復制必需基因進行修改，使其不能在昆蟲細胞中正常復制，只有和對應的轉移載體同源重組，修復其復制必需基因，才能在昆蟲細胞中進行復制，只有當Super ibac DNA和攜帶目的基因的轉移載體pIAT成功同源重組后，才能在昆蟲細胞中復制存活，因此共轉染昆蟲細胞后無需任何篩選，重組率為100%，一步法轉染，簡單快速，尤其經過基因改造后，重組蛋白更穩定,蛋白生物活性更高。

Super ibac P DNA專門開發用于表達蛋白生產病毒顆粒（virus-like particle, VLP），也適用于胞質蛋白的表達。該系統細胞在極晚期才裂解，因此可延長重組蛋白細胞內加工組裝成VLP的時間，從而提高VLP的產量。

運輸及保存條件:

低溫運輸，-20℃保存。

產品規格及組分：

組分名稱	規格
Super ibac P DNA	25ul
pIATGFP	25ul

使用方法：

共轉染昆蟲細胞生產重組桿狀病毒實驗操作流程：

1. 接種細胞：將生長對數期的sf9細胞計數，將1 x 10⁶ Sf9 細胞鋪均勻種于35mm平皿中，靜置至少1小時；

下一步操作之前觀察細胞確保細胞達到近匯合細胞單層。

2. 準備共轉染質粒：取0.1mL無血清無抗生素細胞培養基到1.5mL EP管中，加入100ng super iBac DNA （5uL）和500ng 轉移質粒pIAT（5uL），輕輕混勻。加入適量轉染試劑，如5uL Lipofectin，混勻，室溫靜置20分鐘，以形成脂質體-DNA混合物。

3. 移去培養皿中1mL培養基，若細胞培養基中有血清，則用1mL無血清培養基洗滌細胞兩遍，最后加入1mL無血清培養基，注意，培養皿中留取1mL的培養基。

4. 立即將混勻的0.1mL DNA+脂質體混合液，輕輕加入到細胞培養皿中間，28℃培養箱溫育5-24小時。

5. 取出培養皿加入1mL新鮮細胞培養基（可以是10％血清培養基，也可根據需要加入抗生素），繼續28℃培養箱培養至5天。

6. 離心，收獲平皿中的培養液上清，放入無菌管中，作為重組病毒種子。重組病毒種子可以長期保存于-80℃，也可短時間保存于4℃。

昆蟲桿狀病毒表達系統BEVS介紹

昆蟲桿狀病毒表達系統（Baculovirus Expression Vector System－BEVS）廣泛應用于科研和工業生產領域。與其他常用的重組蛋白表達系統相比，昆蟲桿狀病毒表達系統具有外源基因表達水平高、易于表達異源多聚體蛋白、安全性等優勢，表達的重組蛋白通常具有正確的翻譯后修飾和生物學活性，如二硫鍵的形成、磷酸化、糖基化等等。同時昆蟲細胞懸浮生長，容易放大培養，有利于大規模表達重組蛋白。

Genenode君諾德公司，國內獨家提供自產的第二代昆蟲桿狀病毒表達產品Super ibac，包括桿狀病毒DNA（Super ibac DNA），轉移載體(pIAT)，對照轉移載體(pIAT GFP)和Super ibac DNA Kit。相較于其他類似產品，我們價格更優惠，供貨更迅速，同時還可以提供更快速、高效、經濟的昆蟲桿狀病毒表達重組蛋白服務，自主研發生產的桿狀病毒表達試劑盒可以達到更高的重組蛋白表達水平，經驗豐富的技術人員能夠為您推薦適合的服務，迅速解決在表達純化過程中遇到的問題。

技術原理:

Super iBac系統是一個全新的生產重組桿狀病毒的技術平臺，免去了從親代病毒中篩選重組病毒的步驟，不需要進行空斑實驗，一步法桿狀病毒蛋白表達系統，是目前最領先的桿狀病毒表達系統。

通過對桿狀病毒DNA的復制必需基因進行修改，使其不能在昆蟲細胞中正常復制，只有和對應的轉移載體同源重組，修復其復制必需基因，才能在昆蟲細胞中進行復制，只有當Super ibac DNA和攜帶目的基因的轉移載體pIAT成功同源重組后，才能在昆蟲細胞中復制存活，因此共轉染昆蟲細胞后無需任何篩選，重組率為100%，一步法轉染，簡單快速，尤其經過基因改造后，重組蛋白更穩定,蛋白生物活性更高，適合分泌蛋白，膜蛋白，毒性蛋白等難表達的蛋白。

Super ibac昆蟲桿狀病毒表達系統技術特點:

1.重組蛋白表達水平高（最高可達細胞總蛋白的50%），大多數為有生物功能的可溶性蛋白；

2.真核表達系統，重組蛋白生物學活性高，能同時表達多個外源基因；

3.可進行翻譯后修飾:磷酸化修飾, 形成正確折疊的二硫鍵, 進行N-和O-型糖基化修飾

4.表達人源化蛋白，昆蟲細胞中糖基化途徑克服人源糖蛋白的問題。

5.大多數昆蟲細胞系在不加血清培養基中快速生長，得到高滴度病毒和高產量重組蛋白；

6.相對于其他真核表達系統成本較低，硬件設施成本低接近于原核表達，無需CO2培養箱，無需血清培養基；

7.規模化培養簡單經濟，適合自動化生產，昆蟲細胞比哺乳動物細胞操作簡單；

8.商業化的BEVS系統讓病毒重組及蛋白表達變得更簡單；

不同蛋白表達系統的比較：

	優點	缺點
大腸桿菌	遺傳背景清楚、培養費用低、耐受能力強、抗污染能力強、穩定性好、適用范圍廣	缺乏蛋白質翻譯后加工機制; 目的蛋白常以包涵體形式釋放，產物純化困難，表達的蛋白生物活性低
哺乳動物細胞	表達的蛋白能進行翻譯后修飾并正確的折疊；能組成性或誘導性地表達目的蛋白；目的蛋白更接近天然狀態，適用于表達完整的大分子	表達量低、操作繁瑣、成本較高、不適合用于蛋白大規模生產
酵母細胞	生長繁殖速度快，培養條件普通，可大規模生產，成本相對低能夠得到折疊及修飾后的蛋白質高水平表達蛋白質可克服異源蛋白降解	大多的重組蛋白表達效率較低、過度糖基化
昆蟲桿狀病毒	高效重組：重組率100% 能同時表達多個外源基因表達產量高，超過50%蛋白可被表達可進行翻譯后的各種修飾相比如其他表達系統，該系統成本低，硬件設施要求低，無需CO2培養箱，無需血清培養基培養簡單經濟，適合自動化生產

不同桿狀病毒表達系統的比較

桿狀病毒表達系統介紹（BEVS）

第一代表達系統: Bac-to-Bac	1.需要先在大腸桿菌系統中生產重組病毒, 篩選純化后再轉染昆蟲細胞; 2.重組效率非常低，大量篩選工作。
第一代表達系統: BacPAK6/BaculoGold	1.將桿狀病毒DNA線性化, 引入多個Bsu361限制性酶切位點; 2.Bsu361不能100%切割病毒DNA使之線性化, 重組病毒仍需要進行空斑篩選。
第一代表達系統: BaculoDirect	1.桿狀病毒DNA線性化； 2.需要利用更昔洛韋（核苷類似物）篩選重組病毒，對細胞有毒性； 3.重組效率低，需要好幾輪的擴繁。
第二代表達系統: iBac(Genenode)	1.高效重組：重組率100%,經基因改造,僅重組病毒才能成活,無需加抗生素和任何篩選工作； 2.蛋白質量高：經基因改造,提高分泌蛋白效率，重組蛋白更穩定,蛋白生物活性更高； 3.適用于難表達的蛋白：分泌蛋白，膜蛋白，毒性蛋白；

轉染GFP基因：

轉染GFP基因 Bac-Bac

桿狀病毒宿主細胞：

細胞系	來源	應用	培養基
Sf-9	Spodopterafrugiperda Sf-9 (Pupal ovarian tissue)	重組桿狀病毒生產胞內蛋白表達空斑分析	Sf-900II/III SFM HyQ SFX
Sf-21	Spodopterafrugiperda Sf-21 (Pupal ovarian tissue)	胞內蛋白表達重組分泌蛋白	Sf-900II/III SFM ESF-921 HyQ SFX
Hi-5	Trichoplusiani Hi-5 (Ovarian cells)	重組分泌蛋白	EX-CELL 405 Express Five SFM HyQ SFX
Tri-Ex	Sf-9 derivative	胞內蛋白表達	TriEX

桿狀病毒DNA的選擇：

桿狀病毒DNA

特點

Super ibac S DNA

適合常規蛋白表達，尤其適合糖基化蛋白，分泌蛋白，膜蛋白，毒性蛋白等難表達的蛋白。

Super ibac P DNA

專門開發用于表達蛋白生產病毒顆粒（VLP），也適用于胞質蛋白的表達。

產品線（具體請詢價）：

貨號	產品名稱	產品規格	備注
202818	Super ibac S DNA Kit	5rnx	試劑盒(all-in-one kit)
200818	Super ibac S DNA	5rnx	桿狀病毒DNA
201801	pIAT1	3 ug	轉移載體
201802	pIAT2	3 ug	轉移載體
201803	pIAT GFP	3 ug	對照轉移載體
202816	Super ibac P DNA Kit	5rnx	試劑盒(all-in-one kit)
200816	Super ibac P DNA	5rnx	桿狀病毒DNA

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	優點	缺點
大腸桿菌	遺傳背景清楚、培養費用低、耐受能力強、抗污染能力強、穩定性好、適用范圍廣	缺乏蛋白質翻譯后加工機制; 目的蛋白常以包涵體形式釋放，產物純化困難，表達的蛋白生物活性低
哺乳動物細胞	表達的蛋白能進行翻譯后修飾并正確的折疊；能組成性或誘導性地表達目的蛋白；目的蛋白更接近天然狀態，適用于表達完整的大分子	表達量低、操作繁瑣、成本較高、不適合用于蛋白大規模生產
酵母細胞	生長繁殖速度快，培養條件普通，可大規模生產，成本相對低能夠得到折疊及修飾后的蛋白質高水平表達蛋白質可克服異源蛋白降解	大多的重組蛋白表達效率較低、過度糖基化
昆蟲桿狀病毒	高效重組：重組率100% 能同時表達多個外源基因表達產量高，超過50%蛋白可被表達可進行翻譯后的各種修飾相比如其他表達系統，該系統成本低，硬件設施要求低，無需CO2培養箱，無需血清培養基培養簡單經濟，適合自動化生產

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