唾液DNA收集保存運輸提取試劑盒(離心柱型)

Saliva collection and preservation DNA Extraction Kit(Column)

包裝規格：

一.產品介紹：
   傳統的人類基因組DNA樣品的采集往往需要抽血采集并提取全血基因組DNA獲得。該方法有幾個明顯的缺點：需要一定的采血設備并需要具有醫務知識的人員來完成；抽血的疼痛造成排斥拒絕采樣；侵入性采集增加了感染的可能性；采集后血液樣品必須低溫運輸保存。本試劑盒可提供無疼痛、非侵入性的方法，患者不用忍受抽血的疼痛和感染的風險就能獲得高質量、高數量的樣品，受測者排斥性低，嬰兒和老人都能方便取得DNA樣本。收集過程十分簡單，受測者將唾液吐至保存液內混勻就完成收集過程。混勻后常溫下可運輸保存長達一年不會變質。能夠節省運送、保存冷藏設備和電力費用。收集的唾液通過幾個簡單步驟便可提取DNA。抽取的DNA產量平均達110 μg / 2 mL唾液。

二.產品特點：
1.非侵入性采檢方式免除了抽血的疼痛和降低了污染風險，并增加了取檢的便利性，可由受檢者自行取樣。
2.僅需2ml的唾液樣本，即可取得約110μg的DNA(不同個體產量差異很大)。
3.采樣后的檢體可穩定地儲存于室溫環境一年以上。

三.適用范圍：
1.針對唾液樣本中的DNA進行收集、保存、運輸、純化。
2.替代或者配套Oragene 唾液收集管使用。

四.儲存條件：
1.細胞裂解液低溫時可能出現析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2.避免試劑長時間暴露于空氣中發生揮發、氧化、pH值變化，各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。

五.操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）
 唾液樣品收集步驟：
1.用清水漱口1～2次，然后吐掉。
2.漱口后等候至少5分鐘方可采集唾液，期間不要進食、飲用各種飲料。
3.將唾液(不是喉嚨中痰液)吐到5ml 采集管中，直至2ml 刻度位置。(不可將痰液吐到收集管中，若唾液不足，可做口舌運動，促進分泌。浮在唾液上層的少量泡沫不包括計算在2ml唾液采集量內，采集過程必須在30分鐘內完成)
4.將等體積2ml保存液全部倒在5ml唾液采集管中，充分顛倒混勻后旋緊蓋子。

唾液DNA提取步驟(2ml唾液量舉例，可按比例放大縮小每次提取的唾液量)：
細胞裂解
1.將保存液/唾液混合物放置于50°C 水浴中至少1小時或50°C空氣孵箱至少2小時。
2.轉移4ml混合物 (2 ml 唾液加2 ml保存液)到一個15 ml或者50 ml 的離心管。加入1ml裂解液和10 μl RNase A 溶液(10mg/ml). 高速渦旋振蕩10秒后室溫放置 10分鐘。

雜質沉淀
3.加入1. 7 ml雜質沉淀液到上述裂解混合物中。高速渦旋振蕩25秒，充分混勻雜質沉淀液和裂解混合物。
4.8,000 x g 離心 5 分鐘。沉淀的雜質和蛋白會在管底形成一個致密的沉淀團。如果蛋白沉淀不太致密，可以冰上放置5 分鐘，然后重復步驟4。

DNA 沉淀
5.仔細轉移上清(含有 DNA)到一個新的15 ml或者50 ml 的離心管。注意不要觸動管底沉淀。加入5ml異丙醇。(唾液DNA含量較低時，加入40μl Glycogen 20mg/ml可能提高一些產量)，輕柔顛倒混勻50次（有時可以看見沉淀）。
6.2,500 x g 離心3分鐘， 此時一般可在管底看到白色的DNA沉淀。
7.倒棄上清， 倒置后在吸水紙上輕敲幾下以盡可能吸干。加入5ml 70％乙醇，顛倒幾次漂洗DNA沉淀。
8.2,500 x g離心1分鐘, 仔細倒去上清(沉淀很松，注意不要把DNA沉淀倒掉了)。
9.倒置后在吸水紙上輕敲幾下以控干殘留乙醇，還可以用槍頭小心吸掉管底沉淀周圍和管壁的殘留乙醇，空氣晾干沉淀幾分鐘(不要干過頭，也不要殘留乙醇)。

DNA 溶解水化
10.加入250μl -400μl DNA溶解液重新水化溶解DNA沉淀，輕彈管壁混勻。
11.可以放置在65℃溫育30-60分鐘(不要超過一小時)，然后在室溫或者4℃放置過夜來重新水化DNA，中間不時的輕彈管壁幫助重新水化DNA。
12.DNA可以存放在2-8℃，如果要長時間存放，可以放置在-20°C 或者-80°C。