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哺乳動物蛋白表達與純化服務

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真核哺乳動物細胞憑借蛋白折疊和翻譯后修飾的優點，使其蛋白更接近天然蛋白，從而獲得與天然蛋白相同的生物活性。由哺乳動物系統表達的重組蛋白通常應用于功能蛋白，抗體生產和臨床疫苗等。

我們提供的哺乳動物細胞重組蛋白表達服務，主要包括目標基因生物信息學分析，瞬時轉染表達，穩定細胞系構建，以及重組抗體的生產。我們通常采用無血清懸浮細胞培養的方法，對HEK293（人胚腎細胞）和CHO（中國倉鼠卵巢細胞）等真核宿主細胞進行培養。

蛋白表達服務表單填寫：蛋白質表達純化服務表單

服務內容簡介

1.高表達質粒構建與優化
將客戶的cDNA克隆至哺乳動物瞬時/穩定表達載體上，同時我們可以根據客戶的要求對每個載體添加分泌信號肽或純化標簽。在此基礎上，我們還可以幫助客戶優化流程，生產出高效穩定的細胞系。

2.穩定細胞系構建
穩定基因表達是將目的基因克隆到哺乳動物穩定表達載體上，整個實驗操作流程分為轉染，篩選、細胞分離和評估（評估克隆在無血清培養條件下的表達量和適應性），目的是使之可以長期穩定生產。

3.瞬時轉染表達（TGE）
相較于穩定基因表達，TGE主要用于短期內制備蛋白。我們的瞬時表達使用的是無血清懸浮培養的方法，在完成表達純化后，交付給客戶重組蛋白。（注：轉染后的檢測包括：PCR檢測目的基因，SDS-PAGE及Western blot檢測目的蛋白的表達情況）

4.生產工藝優化
我們會對表達過程及表達產物進行及時優化，預測細胞表達量的同時還會對增長率，轉種率，細胞群，以及表達條件等進行全面分析。

5.重組蛋白鑒定
通過親和層析，離子交換層析和凝膠過濾層析等方法純化蛋白之后，我們有完備的蛋白檢測手段：SDS-PAGE或Native-PAGE檢測，Western blotting，吸收光譜，N末端序列測定，質譜分析，核磁共振波譜分析。

細胞瞬時轉染蛋白表達能夠在短期內得到毫克至克級的重組蛋白，廣泛地應用于基因產物的快速表達及蛋白質的小規模制備等方面。細胞瞬時轉染表達能夠快速靈活的制備重組蛋白，細胞在轉染后1-4天內即能可收獲并進行分析。以CHO（中國倉鼠卵巢細胞）和HEK293（人胚腎細胞）為表達宿主進行懸浮培養，能夠獲得大量的培養上清液，可生產毫克至克級的重組蛋白。目前，瞬時表達技術已廣泛應用于抗體生產，疾病診斷，疫苗開發等多個領域。

服務項目	服務內容	服務周期	交付內容
基因合成亞克隆	基因合成	3~4周	基因構建測序報告
	載體構建
	質粒制備
瞬時轉染	細胞傳代培養	1~2周	瞬時轉染表達與檢測純化報告純化產物
	細胞轉染
	收獲細胞
表達純化	表達小試	3~4周

哺乳動物CHO穩定細胞系構建服務，與瞬時轉染不同，穩定細胞系構建是指外源基因進入受體細胞并整合到細胞的染色體上，使宿主細胞可長期表達目的基因，因此也稱為穩定轉染。

項目	服務內容	構建周期	最終交付
基因合成&亞克隆	密碼子優化&基因合成	4周	表達載體；
	載體構建&質粒制備		測序報告；
細胞轉染	細胞轉染	4周	3株穩轉細胞株； 0.5~1mg 90%；純度蛋白；
	表達檢測（WB或ELISA）
穩定細胞系構建	壓力篩選	2月
	穩轉細胞株篩選
	蛋白生產
	細胞凍存

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